超凈工作臺在細胞培養實驗中的應用

點擊次數：1844 更新時間：2021-12-03

植物(plant)組織具有無限增殖和產生不定芽、不定根的能力。凈化工作臺的原理：潔凈環境是在特定的空間內，潔凈空氣(進濾空氣)按設定的方向流動而形成的。以氣流方向來分，現有的超凈工作臺可分為垂直式，由內向外式以及側向式。在培養條件(tiáo jiàn)適宜時，只要通過一個超凈工作臺，以及用一個芽可以培養出許多植株來。其在保持優良砧木及品種種性、進行工廠化育苗方面具有很好的意義。

超凈工作臺在細胞培養實驗中的應用方法步驟（procedure)如下：


　　一、外植體接種與材料(Material)消毒(disinfection)
   取田間當年生新梢或一年生枝蔓，去葉，用肥皂水將表面(appearance)刷洗，并用自來水沖洗干凈，剪成一芽一段，放入干凈燒杯，拿進超凈工作(gōng zuò)臺；先用70%酒精過一下，無菌（fungus)水（用高壓鍋，在120℃下，滅菌30分鐘的水）沖洗3遍；再用0.1%液消毒(disinfection)5～10分鐘，無菌水沖洗3遍；然后用酒精燈(Alcohol lamp)火焰消毒過的工具（鑷子、剪刀、撥針、解剖刀等）剝去鱗片、葉柄，取出帶數個葉原基的幼芽接入培養基，半包埋。

   培養基配好后裝入廣口的罐頭瓶、三角瓶或試管，裝入量為1～2厘米高。凈化工作臺用途：廣泛適用于藥衛生、生物制藥、食品、學科學實驗、光學、電子、無菌室實驗、無菌微生物檢驗、植物組培接種等需要局部潔凈無菌工作環境的科研和生產部門。也可連接成裝配生產線具有低噪聲、可移動性等優點。120℃滅菌(Sterilization)（fungus)30分鐘后備用。

   外植體接種后放到培養室的培養架上培養。培養條件(tiáo jiàn)為：光照1000勒克斯，8～10個小時，暗14～16小時；溫度（temperature)25～28℃。培養1～2周，即可看出是否消毒(disinfection)*，有無感染。及時巡查，將未感染的外植體轉接到新的培養瓶內，丟棄已感染的外植體。


　　二、繼代繁殖
   上述接入的外植體培養1～2個月，即可長到2～3厘米長。在超凈工作(gōng zuò)臺上，將其剪成約1厘米長莖段，接種到新的培養基中（培養基的配方同上）。剪莖段時所用工具和培養皿（或牛皮紙）都要經過消毒，消毒方法分別同上述酒精（術語稱乙醇）燈消毒法和高壓消毒法。

   其后，大約每25天左右進行一次繼代培養。每次的莖段增殖量約為3～4倍。反復進行，直到所需數量。


　　三、生根
   上述培養的莖段長到2厘米以上時，即可用于生根。生根培養基的成分為上述培養基的大量元素減半，除激素和蔗糖外，其他成分不變。

   生根培養基配好后也需高壓滅菌（120℃，30分鐘）后使用。

   生根培養20天左右，莖段上即可長出根，成為完整苗。生根苗長到3～5厘米長時即可鍛煉、移栽。


　　四、生根苗的鍛煉、移栽
   （一）鍛煉

   組培苗在人工培養條件(tiáo jiàn)下長期生長，對自然生長環境(environment)的適應性減弱。超凈工作臺是為了適應現代化工業、光電產業、生物制藥以及科研試驗等*域對局部工作區域潔凈度的需求而設計的。移栽前需要一個過渡階段，即鍛煉。鍛煉方法(method)為：將培養瓶移**自然光照下2～3天，打開瓶口2～3天，再移栽。

   （二）移栽

   移栽時先洗凈根上培養基，避免(avoid)培養基感染雜菌（fungus)致苗死亡。移栽方法及灌水、遮陽等管理同實生苗移栽。但注意(attention)組培苗比較嬌嫩，需輕盈操作。


　　五、工廠化育苗

將上述培養基制備及超凈工作臺相關(related)、裝瓶、消毒(disinfection)、無菌（fungus)苗增殖、生根、鍛煉、移栽等過程全部放在實驗（experiment)室和溫室中進行，即為工廠化育苗。目前，這樣的生產線已在意大利和法G投入使用。但外植體接種尚需人工操作。

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